Parafiinileikkeet
1. Näytteen kiinnittäminen eli fiksaus, tarkoituksena kudoksen kiinteyttäminen ja säilöminen solujen omien entsyymien hajottavaa vaikutusta (=autolyysiä) vastaan
- fysikaaliset menetelmät:
jäädytyskuivaus: kudos jäädytetään nopeasti, kuivataan vakuumissa ja kiinnitetään höyryssä
jäädytyskorvaus: kudos jäädytetään nopeasti, pannaan kylmään alkoholiin, jossa jää korvautuu vähitellen alkoholilla- kemialliset menetelmät:
infiltraatio (=imeytys), pieni kudospala upotetaan fiksatiiviin
perfuusio (=läpihuuhtelu), ruiskutetaan puskuroitu fiksatiivi (usein glutaraldehydi) eläimen verenkiertoon- kemiallisia fiksaatioaineita: formaldehydi, glutaraldehydi, asetoni, metanoli
- kemialliset menetelmät:
2. Dehydrointi (=veden poisto), vesi täytyy ensiksi syrjäyttää näytteestä nousevan alkoholi-sarjan avulla, sillä parafiini ei ole vesiliukoinen
3.Dehydroivan aineen poisto (alkoholin poisto) ja korvaus parafiiniliuottimella, alkoholi poistetaan ksyleenillä
4.Infiltrointi (=imeyttäminen) parafiinilla, kudokseen imeytetään parafiini (52-56°C)
5. Petaus, leikkausta varten parafiinilla imeytetyt näytteet valetaan parafiiniblokkeihin, hyvin valmistettu parafiiniblokki säilyy määräämättömän kauan kuivassa varastossa
6. Leikkaus, 5-15 µm leikkeet valmistetaan mikrotomilla
7. Oikaisu, parafiinileikkeet tai leikenauhat aukaistaan panemalla ne ensin kylmän ja sitten lämpimän (37°-56°C) vesihauteen pinnalle
8. Kiinnitys objektilasille, säilytys yli yön 40 °C
9. Värjäyksen eri vaiheet
- parafiinin poisto ksyleenillä
- ksyleenin poisto ja siirto vesifaasiin laskevan alkoholisarjan avulla (=hydraus)
- värjäystoimenpiteet
- siirto orgaaniseen faasiin nousevan alkoholi-sarjan avulla (=dehydraus)
- alkoholin poisto ksyleenillä
- ksyleenin poisto ja siirto vesifaasiin laskevan alkoholisarjan avulla (=hydraus)
10. Sulkeminen, sitoo peitinlasin ilmatiiviisti, sulkemiseen käytettävältä aineelta vaadittavat ominaisuudet
- sopivat optiset ominaisuudet (taitekerroin n=1.52)
- ei reagoi kudoksen tai väriaineiden kanssa
- käytössä olevia aineita ovat mm. kanadanbalsami, Depex
- ei reagoi kudoksen tai väriaineiden kanssa