not available fi se
not available 2 not available
www.solunetti.fi
taso 2

Parafiinileikkeet

1. Näytteen kiinnittäminen eli fiksaus, tarkoituksena kudoksen kiinteyttäminen ja säilöminen solujen omien entsyymien hajottavaa vaikutusta (=autolyysiä) vastaan

fysikaaliset menetelmät:
jäädytyskuivaus: kudos jäädytetään nopeasti, kuivataan vakuumissa ja kiinnitetään höyryssä
jäädytyskorvaus: kudos jäädytetään nopeasti, pannaan kylmään alkoholiin, jossa jää korvautuu vähitellen alkoholilla
kemialliset menetelmät:
infiltraatio (=imeytys), pieni kudospala upotetaan fiksatiiviin
perfuusio (=läpihuuhtelu), ruiskutetaan puskuroitu fiksatiivi (usein glutaraldehydi) eläimen verenkiertoon
kemiallisia fiksaatioaineita: formaldehydi, glutaraldehydi, asetoni, metanoli

2. Dehydrointi (=veden poisto), vesi täytyy ensiksi syrjäyttää näytteestä nousevan alkoholi-sarjan avulla, sillä parafiini ei ole vesiliukoinen

3.Dehydroivan aineen poisto (alkoholin poisto) ja korvaus parafiiniliuottimella, alkoholi poistetaan ksyleenillä

4.Infiltrointi (=imeyttäminen) parafiinilla, kudokseen imeytetään parafiini (52-56°C)

5. Petaus, leikkausta varten parafiinilla imeytetyt näytteet valetaan parafiiniblokkeihin, hyvin valmistettu parafiiniblokki säilyy määräämättömän kauan kuivassa varastossa

6. Leikkaus, 5-15 µm leikkeet valmistetaan mikrotomilla

7. Oikaisu, parafiinileikkeet tai leikenauhat aukaistaan panemalla ne ensin kylmän ja sitten lämpimän (37°-56°C) vesihauteen pinnalle

8. Kiinnitys objektilasille, säilytys yli yön 40 °C

9. Värjäyksen eri vaiheet

parafiinin poisto ksyleenillä
ksyleenin poisto ja siirto vesifaasiin laskevan alkoholisarjan avulla (=hydraus)
värjäystoimenpiteet
siirto orgaaniseen faasiin nousevan alkoholi-sarjan avulla (=dehydraus)
alkoholin poisto ksyleenillä

10. Sulkeminen, sitoo peitinlasin ilmatiiviisti, sulkemiseen käytettävältä aineelta vaadittavat ominaisuudet

sopivat optiset ominaisuudet (taitekerroin n=1.52)
ei reagoi kudoksen tai väriaineiden kanssa
käytössä olevia aineita ovat mm. kanadanbalsami, Depex